Resultado da pesquisa (6)
Termo utilizado na pesquisa tuberculin test
#1 - Indirect ELISA as a complementary diagnostic method of bovine tuberculosis
Abstract in English:
Bovine tuberculosis is an economic and health problem, requiring precise diagnostic methods for its control and eradication. The aim of this study was to evaluate the performance of a commercial enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) test for the diagnosis of bovine tuberculosis. A total of 1,644 cattle from eight dairy herds were evaluated using the comparative cervical tuberculin test (CCTT). Three of the herds had no recent tuberculosis infection, and the other five had shown positive results in a previous tuberculin test. For the serological diagnosis of tuberculosis, a commercial ELISA antibody test kit for Mycobacterium bovis was used. Serum samples from 846 cattle from the eight herds were evaluated using ELISA for M. bovis. Animals that were positive based on either CCTT or ELISA for M. bovis or both were sent to slaughter. Samples of their lungs, livers, and lymph nodes were collected and stored under refrigeration for microbiological culture and subsequent confirmation by polymerase chain reaction. Samples from the same tissues were also fixed with 10% formaldehyde in bottles for histopathological examination and stained with hematoxylin and eosin (HE). Of the 1,644 cattle, 61 were considered positive and 65 inconclusive based on CCTT. Retesting of the inconclusive samples identified an additional 19 positive cases, totaling 80 (4.8%) CCTT-positive animals from five herds. ELISA for M. bovis identified 4.2% (36/846) positive cattle, of which 35 were considered negative and one inconclusive based on CCTT. Of the 36 positive cases identified by ELISA for M. bovis, 27 were euthanized, 11% (3/27) showed suggestive lesions of tuberculosis on macroscopic examination, and two were confirmed by histological, microbiological, and PCR methods. The weak association of ELISA for M. bovis with the results obtained by macroscopic, histological, and microbiological isolation indicates the fragility of ELISA performance in field conditions. Therefore, it is suggested that its use as a complementary method for herd sanitation be based on the local epidemiological situation.
Abstract in Portuguese:
A tuberculose bovina é um problema econômico mundial e de saúde, que requer métodos de diagnóstico precisos para controle e erradicação. Objetivou-se com este estudo avaliar o desempenho de um teste comercial de ELISA no diagnóstico da tuberculose bovina. Foram avaliados pelo teste cervical comparativo (TCC) 1644 bovinos, provenientes de oito rebanhos de exploração leiteira, sendo três deles sem histórico recente da doença, e outros cinco com resultados positivos no último exame de tuberculinização. Para o diagnóstico sorológico da tuberculose utilizou-se um kit comercial de ELISA Mycobacterium bovis antibody test (ELISA M. bovis). Amostras de soro sanguíneo de 846 bovinos provenientes dos mesmos rebanhos foram também avaliadas no ELISA M. bovis. Os bovinos positivos no TCC e/ou ELISA M. bovis foram encaminhados para o abate sanitário. Dos positivos no ELISA para M. bovis foi realizado o exame macroscópico das carcaças e classificação das mesmas em: com presença ou ausência de lesões. Amostras de pulmão, fígado, e linfonodos, foram colhidas em duplicata para realização dos exames de cultivo microbiológico com posterior confirmação por PCR, e exame histopatológico com coloração de hematoxilina e eosina (HE). Dos 1,644 bovinos, 61 foram considerados positivos e 65 inconclusivos no TCC. O reteste dos inconclusivos identificou mais 19 positivos. No total, 80 (4,8%) bovinos positivos no TCC, provenientes de 5 rebanhos foram encaminhados para abate. O ELISA para M. bovis identificou 4,2% (36/846) de bovinos positivos, sendo 36 considerados negativos e um inconclusivo no exame de tuberculinização. Dos positivos no ELISA para M. bovis, 27 foram eutanasiados, e no exame macroscópico das carcaças 11% (3/27) dos animais apresentaram lesões sugestivas de tuberculose, e em apenas dois houve confirmação da doença pelos métodos histológico, microbiológico e PCR. A baixa associação dos resultados obtidos no ELISA para M. bovis com os exames macroscópico, histológico e isolamento microbiológico apontam para a fragilidade do desempenho do ELISA para o diagnóstico de tuberculose. Sugere-se assim que seu uso como método complementar para saneamento de rebanhos, seja adotado com cautela e considere a situação epidemiológica local.
#2 - False-negative reactions to the comparative intradermal tuberculin test for bovine tuberculosis, 37(12):1380-1384
Abstract in English:
ABSTRACT.- Rodrigues R.A., Meneses I.I.F.S., Jorge K.S.G., Silva M.R., Santos L.R., Lilenbaum W., Etges R.N. & Araújo F.R. 2017. False-negative reactions to the comparative intradermal tuberculin test for bovine tuberculosis. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1380-1384. Embrapa Gado de Corte, Av. Rádio Maia 830, Campo Grande, MS 79106-550, Brazil. E-mail: flabio.araujo@embrapa.br
According to the Brazilian National Program for the Control and Eradication of Animal Brucellosis and Tuberculosis (PNCEBT), the routine tests for the diagnosis of bovine tuberculosis in the country are the simple intradermal tuberculin test (SITT) of the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), the caudal fold test and the comparative intradermal tuberculin test (CITT). The latter is also used as a confirmatory test. A group of 53 animals from three dairy herds in a focal area for bovine tuberculosis, that were submitted to depopulation in the state of Rio Grande do Sul, were submitted to the CITT. Tissues were cultured and the resulting colonies were confirmed by PCR and DNA sequencing. Among the 53 animals analyzed using the CITT, 32 (60.4%) were negative, 14 (26.4%) were positive and seven (13.2%) results were inconclusive. The CITT detected 11 of the 39 animals with culture-confirmed M. bovis infection as positive. Among the total of 14 uninfected animals based on cultures, the CBT detected eight as negative. Thus, the CITT demonstrated sensitivity of 28.2% and specificity of 57.1% for the population sampled. A total of 24/32 (75.0%) of the animals with negative CITT results were culture positive (confirmed by PCR) and were considered false negatives based on the CITT. The maintenance of these false-negative animals in herds has serious implications for the control of the disease, since they can be a source of infection. The addition of complementary tests could help identify such animals and increase the odds of diagnostic success.
Abstract in Portuguese:
RESUMO.- Rodrigues R.A., Meneses I.I.F.S., Jorge K.S.G., Silva M.R., Santos L.R., Lilenbaum W., Etges R.N. & Araújo F.R. 2017. False-negative reactions to the comparative intradermal tuberculin test for bovine tuberculosis. [Reações falso-negativas ao teste cervical comparativo para tuberculose bovina.] Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1380-1384. Embrapa Gado de Corte, Av. Rádio Maia 830, Campo Grande, MS 79106-550, Brazil. E-mail: flabio.araujo@embrapa.br
No Brasil, segundo o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Animal (PNCEBT), do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), os testes de rotina para o diagnóstico de tuberculose bovina são o teste cervical simples (TCC), o teste da prega caudal (TPC) e o teste cervical comparativo (TCC), sendo que o último também é utilizado como teste confirmatório. Um grupo de 53 animais oriundos de três rebanhos leiteiros de área de foco para tuberculose bovina que foram submetidos a vazio sanitário no Rio Grande do Sul foi submetido ao TCC. Os tecidos destes animais foram cultivados e as colônias resultantes confirmadas por PCR e sequenciamento de DNA. Dos 53 animais analisados no TCC, 32 (60,4%) foram negativos, 14 (26,4%) positivos e sete (13,2%) inconclusivos, com base no PNCEBT. O TCC detectou como positivos 11 dos 39 animais com infecção por M. bovis confirmada por cultivo. Do total de 14 animais não infectados, baseado na cultura, o TCC detectou oito como negativos. Assim, o TCC apresentou, para a população amostrada, sensibilidade de 28,2% e especificidade de 57,1%. Um total de 24/32 (75,0%) dos animais negativos ao TCC foi positivo no cultivo (confirmado por PCR), sendo considerados falso-negativos ao TCC. A manutenção destes animais falso-negativos nos rebanhos tem sérias implicações para o controle da enfermidade, já que os mesmos podem ser fonte de infecção. A adição de testes complementares poderia auxiliar na identificação destes animais, aumentando a cobertura diagnóstica.
#3 - Nasal swab real-time PCR is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis, 37(6):549-554
Abstract in English:
ABSTRACT.- Mayer F.Q., Reis E.M., Bezerra A.V.A., Rodrigues R.O., Michel T., Cerva C. & Bertagnolli A.C. 2017. Nasal swab real-time PCR is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(6):549-554. Laboratório de Biologia Molecular, Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor, Fundação Estadual de Pesquisa Agropecuária, Estrada Municipal do Conde 6000, Eldorado do Sul, RS 92990-000, Brazil. E-mail: bimmayer@gmail.com
Bovine tuberculosis (bTB) is a zoonosis causing economic losses and public health risks in many countries. The disease diagnosis in live animals is performed by intradermal tuberculin test, which is based on delayed hypersensitivity reactions. As tuberculosis has complex immune response, this test has limitations in sensitivity and specificity. This study sought to test an alternative approach for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis, based on real-time polymerase chain reaction (PCR). DNA samples, extracted from nasal swabs of live cows, were used for SYBR® Green real-time PCR, which is able to differentiate between Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium avium complexes. Statistical analysis was performed to compare the results of tuberculin test, the in vivo gold standard bTB diagnosis method, with real-time PCR, thereby determining the specificity and sensitivity of molecular method. Cervical comparative test (CCT) was performed in 238 animals, of which 193 had suitable DNA from nasal swabs for molecular analysis, as indicated by amplification of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) gene, and were included in the study. In total, 25 (10.5%) of the animals were CCT reactive, of which none was positive in the molecular test. Of the 168 CCT negative animals, four were positive for M. tuberculosis complex at real time PCR from nasal swabs. The comparison of these results generated values of sensitivity and specificity of 0% and 97.6%, respectively; moreover, low coefficients of agreement and correlation (-0.029 and -0.049, respectively) between the results obtained with both tests were also observed. This study showed that real-time PCR from nasal swabs is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis; thus tuberculin skin test is still the best option for this purpose.
Abstract in Portuguese:
RESUMO.- Mayer F.Q., Reis E.M., Bezerra A.V.A., Rodrigues R.O., Michel T., Cerva C. & Bertagnolli A.C. 2017. Nasal swab real-time PCR is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis. [A PCR em tempo real de swab nasal não é adequada para o diagnóstico in vivo de tuberculose bovina.] Pesquisa Veterinária Brasileira 37(6):549-554. Laboratório de Biologia Molecular, Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor, Fundação Estadual de Pesquisa Agropecuária, Estrada Municipal do Conde 6000, Eldorado do Sul, RS 92990-000, Brazil. E-mail: bimmayer@gmail.com
A tuberculose bovina (bTB) é uma zoonose que causa perdas econômicas e riscos à saúde pública em muitos países. O diagnóstico da doença em animais vivos é realizado pelo teste intradérmico da tuberculina, que é baseado em reações de hipersensibilidade tardia. Como a tuberculose tem resposta imunológica complexa, este teste tem limitações em termos de sensibilidade e especificidade. Este estudo procurou desenvolver uma abordagem alternativa para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina, com base na reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real. As amostras de DNA, extraídas de suabes nasais de vacas vivas, foram usadas para PCR em tempo real com SYBR® Green, capaz de diferenciar os complexos Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium. A análise estatística foi realizada para comparar os resultados de teste de tuberculina, padrão ouro para o diagnóstico in vivo da bTB, com PCR em tempo real, determinando-se assim a especificidade e sensibilidade do método molecular. O teste cervical comparativo (TCC) foi realizado em 238 animais, dos quais 193 tiveram DNA dos suabes nasais adequados para análise molecular, como indicado pela amplificação do gene gliceraldeído-3-fosfato-desidrogenase (GAPDH), e foram incluídos no estudo. No total, 25 (10,5%) animais foram reativos no TCC, dos quais nenhum foi positivo no teste molecular. Dos 168 animais negativos no TCC, quatro foram positivos para o complexo M. tuberculosis na PCR em tempo real a partir dos suabes nasais. A comparação destes resultados gerou valores de sensibilidade e especificidade de 0% e 97,6%, respectivamente; além disso, baixos coeficientes de concordância e correlação (-0,029 e -0,049, respectivamente) entre os resultados obtidos com ambos os testes também foram observados. Este estudo mostrou que a PCR em tempo real a partir de suabes nasais não é adequada para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina; portanto, o teste da tuberculina ainda é a melhor opção para este fim.
#4 - Parameter estimation and use of gamma interferon assay for the diagnosis of bovine tuberculosis in Brazil, 32(4):279-283
Abstract in English:
ABSTRACT.- Lopes L.B., Alves T.M., Stynen A.P.R., Mota P.M.P.C., Leite R.C. & Lage A.P. 2012. Parameter estimation and use of gamma interferon assay for the diagnosis of bovine tuberculosis in Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(4):279-283. Embrapa Agrossilvipastoril, Rodovia MT 222, km 2,5, Caixa Postal 343, Sinop, MT 78.550-970, Brazil. E-mail: luciano.lopes@embrapa.br
This study aimed to evaluate the interference of tuberculin test on the gamma-interferon (INFg) assay, to estimate the sensitivity and specificity of the INFg assay in Brazilian conditions, and to simulate multiple testing using the comparative tuberculin test and the INFg assay. Three hundred-fifty cattle from two TB-free and two TB-infected herds were submitted to the comparative tuberculin test and the INFg assay. The comparative tuberculin test was performed using avian and bovine PPD. The INFg assay was performed by the Bovigam™ kit (CSL Veterinary, Australia), according to the manufacturer’s specifications. Sensitivity and specificity of the INFg assay were assessed by a Bayesian latent class model. These diagnostic parameters were also estimate for multiple testing. The results of INFg assay on D0 and D3 after the comparative tuberculin test were compared by the McNemar’s test and kappa statistics. Results of mean optical density from INFg assay on both days were similar. Sensitivity and specificity of the INFg assay showed results varying (95% confidence intervals) from 72 to 100% and 74 to 100% respectively. Sensitivity of parallel testing was over 97.5%, while specificity of serial testing was over 99.7%. The INFg assay proved to be a very useful diagnostic method.
Abstract in Portuguese:
RESUMO.- Lopes L.B., Alves T.M., Stynen A.P.R., Mota P.M.P.C., Leite R.C. & Lage A.P. 2012. Parameter estimation and use of gamma interferon assay for the diagnosis of bovine tuberculosis in Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(4):279-283. Embrapa Agrossilvipastoril, Rodovia MT 222, km 2,5, Caixa Postal 343, Sinop, MT 78.550-970, Brazil. E-mail: luciano.lopes@embrapa.br
O presente estudo avalia a interferência do teste de tuberculinização no teste do interferon gama (INFg), estima a sensibilidade e a especificidade do INFg em condições brasileiras e simula a utilização dos testes múltiplos usando a tuberculinização comparada e o teste do INFg. Trezentos e cinquenta animais oriundos de dois rebanhos livres e dois rebanhos positivos foram submetidos à tuberculinização comparada e ao teste de INFg. A tuberculinização comparada foi realizada utilizando PPD aviária e bovina. O teste de INFg foi realizado utilizando o kit Bovigam® (CSL Veterinary, Austrália) de acordo com as especificações do fabricante. A sensibilidade e especificidade do teste de INFg foram calculadas pelo Modelo Bayesiano de Classe Latente. Esses parâmetros foram também estimados para os testes múltiplos. Os resultados do teste de INFg no D0 e D3 após o teste de tuberculinização foram comparados pelos testes estatísticos de McNemar e kappa. Os resultados das médias de densidade ótica do teste de INFg em ambos os dias foram similares. A sensibilidade e a especificidade do teste de INFg apresentaram resultados variando (95% intervalo de confiança) de 72 a 100% e 74 a 100%, respectivamente. A sensibilidade do teste em paralelo foi acima de 97,5% enquanto a especificidade do teste em série foi acima de 99,7%. O teste do INFg provou ser um método de diagnóstico muito útil.
#5 - Prevalência para tuberculose caprina no semi-árido paraibano, p.526-532
Abstract in English:
ABSTRACT.- Pignata W.A., Alves C.J., Azevedo S.S., Dantas A.F.M., Gomes A.A.B., Remígio F.R. & Lima F.S. 2009. [Prevalence for Caprine tuberculosis in paraibano semi-arid.] Prevalência para tuberculose caprina no semi-árido paraibano. Pesquisa Veterinária Brasileira 29(7):526-532. Centro de Saúde e Tecnologia Rural, Campus de Patos, Universidade Federal de Campina Grande, Patos, PB 58700-000, Brazil. E-mail: walvet8@hotmail.com
Tuberculosis is an infectious disease of world wide distribution caused by pathogenic mycobacteria that affect humans and several mammals species. In order to determine the prevalence of tuberculosis in goats and to identify risk factors associated with infection, 1,866 goats of different breeds and ages from 84 herds in the microregion of Monteiro, State of Paraíba, Northeast Brazil, were tuberculinized by the Comparative Cervical Test (CCT). Interpretation of the CCT was checked by calculation of the difference obtained between skin measures correspondent to respective tuberculins, before and 72 hours after inoculation: negative, when bovine PPD is smaller than avian PPD or larger in up to 1.8mm; suspicious or inconclusive, reaction to bovine PPD larger than avian PPD between 1.9 and 2.4mm; positive, reaction to bovine PPD larger than or equal to avian PPD in 2.5mm. From goats submitted to CCT, 0.47% (9/1866) reacted positively (95% CI = 0.23%-0.94%). The prevalence of positive herds to caprine tuberculosis was 10.71% (95% CI = 5.02-19.37%). When submitted to necropsy and histopathologic examination, a positive goat at tuberculin test presented tuberculosis-like lesions. The presence of Acid-Alcohol Resistant Bacilli (BAAR) was also detected by direct bacterioscopy; in relation to herd size, herds with larger number of animals (>25) with high incidence of the disease, and presence of the infection was evidenced in properties that raised cattle in association with goats and did not carry out tuberculin tests in cattle.
Abstract in Portuguese:
ABSTRACT.- Pignata W.A., Alves C.J., Azevedo S.S., Dantas A.F.M., Gomes A.A.B., Remígio F.R. & Lima F.S. 2009. [Prevalence for Caprine tuberculosis in paraibano semi-arid.] Prevalência para tuberculose caprina no semi-árido paraibano. Pesquisa Veterinária Brasileira 29(7):526-532. Centro de Saúde e Tecnologia Rural, Campus de Patos, Universidade Federal de Campina Grande, Patos, PB 58700-000, Brazil. E-mail: walvet8@hotmail.com
Tuberculosis is an infectious disease of world wide distribution caused by pathogenic mycobacteria that affect humans and several mammals species. In order to determine the prevalence of tuberculosis in goats and to identify risk factors associated with infection, 1,866 goats of different breeds and ages from 84 herds in the microregion of Monteiro, State of Paraíba, Northeast Brazil, were tuberculinized by the Comparative Cervical Test (CCT). Interpretation of the CCT was checked by calculation of the difference obtained between skin measures correspondent to respective tuberculins, before and 72 hours after inoculation: negative, when bovine PPD is smaller than avian PPD or larger in up to 1.8mm; suspicious or inconclusive, reaction to bovine PPD larger than avian PPD between 1.9 and 2.4mm; positive, reaction to bovine PPD larger than or equal to avian PPD in 2.5mm. From goats submitted to CCT, 0.47% (9/1866) reacted positively (95% CI = 0.23%-0.94%). The prevalence of positive herds to caprine tuberculosis was 10.71% (95% CI = 5.02-19.37%). When submitted to necropsy and histopathologic examination, a positive goat at tuberculin test presented tuberculosis-like lesions. The presence of Acid-Alcohol Resistant Bacilli (BAAR) was also detected by direct bacterioscopy; in relation to herd size, herds with larger number of animals (>25) with high incidence of the disease, and presence of the infection was evidenced in properties that raised cattle in association with goats and did not carry out tuberculin tests in cattle.
#6 - Comparison of the allergic diagnosis of bovine tuberculosis using the comparative and Stormont tests
Abstract in English:
The comparison of the comparative tuberculin test and the Stormont method, performed at the sarne groups of animals, gave highly convergent results in bovines free from tuberculosis and also in infected groups with strong reactors. In weak reactors the results were highly discordant. A group of 21 bovines with negative results at the comparative tuberculin test, but reacting to avian tuberculin, was negative with the Stormont test. Twenty six bovines which reacted strongly positive (4.0mm or more) at the comparative test, with or without non-specific reactions, showed also positive reactions in 88.4%, suspicious reactions in 7.7% and negative reactions in 3.9% at the Stormont test. A group of 19 bovines, initially tested by the Stormont method and considered as infected, when retested by the comparative test after 90 days, showed 84.2% positive reactors and 15.7% negative ones. Groups of bovines with suspicious (2.0 to 2.9mm) or weakly positive reactions (3.0 to 3.9 mm) at the comparative test, showed 20.0% positive, 20.0% suspicious and 60.0% negative reactors in the suspicious group and 53.3% positive, 13.3% suspicious and 33.3% negative reactions in the weakly positive reactors by the Stormont test. Another group of bovines gave suspicious reactions when initially tested by the Stormont method, but showed 50.0% positive, 9.3% suspicious and 40.6 negative reactions when retested by the comparative test. The discordant results of the present and other investigations do not allow to recommend the Stormont test for use in routine procedures for the diagnosis of bovine tuberculosis before a critical evaluation has been made, with slaughter and bacteriological exarnination of reacting animals.
Abstract in Portuguese:
A comparação entre a tuberculinização intradérmica comparada (tuberculina bovina e aviária) e a tuberculinização dupla (com 7 dias de intervalo) conhecida por teste de Stormont, revelou resultados altamente concordantes em grupos de bovinos sem tuberculose e em grupos de animais infectados com fortes reações alérgicas, no entanto, apresentou resultados bem discordantes nos reagentes suspeitos e fracamente positivos em ambos os testes cujas causas não puderam ser esclarecidas por exames necroscópicos e bacteriológicos por razões econômicas. Em um grupo de 21 bovinos com resultados negativos na tuberculização comparada, mas portadores de reações à tuberculina aviária, o teste de Storment revelou também resultados negativos. Em 26 bovinos reagentes positivos no teste comparativo com aumento de espessura da dobra da pele (AEDP) acima de 4,0 mm, com ou sem reações inespecíficas, o teste de Stormont acusou também 88,4% de reações positivas, 7,7% reações suspeitas e 3,9% reações negativas. Em outro experimento, um grupo de 19 bovinos reagentes positivos no teste de Stormont, quando retestado, 90 dias depois pelo teste comparativo, este revelou 84,2% de reagentes positivos e 15,7% de reações negativas. Em grupos de bovinos com reações suspeitas (AEDPs entre 2,0 e 2,9 mm) ou fracamente positivos (AEDPs entre 3,0 e 3,9mm) no teste comparativo, o teste de Stormont revelou 20,0% de reações positivas, 20,0% de reações suspeitas e 60,0% negativas, e 53,3% positivas, 13,3% suspeitas e 33,3% negativas respectivamente. Num grupo de bovinos que no teste de Stormont acusou reações suspeitas e que, 90 dias após foi retestado pela tuberculização comparativa, esta acusou 50,0% de reagentes positivos, 9,3% suspeitos e 40,6% negativos. Os resultados discordantes da presente pesquisa e da de outras não recomendam o uso rotineiro do teste de Stormont no diagnóstico da tuberculose bovina antes de uma avaliação científica criteriosa, com abate e exames bacteriológicos de animais reagentes.
